Существует множество способов диагностики аллергии. Правильный диагноз можно поставить только после комплексного обследования и никогда - после одного анализа. Комплексное аллергологическое обследование начинается с беседы с врачом-аллергологом. Врач расспрашивает о жалобах, о начале заболевания, особенностях его развития, об условиях, в которых аллергическая реакция выражена максимально, о наличии подобных заболеваниях у родственников, условиях быта и работы и т.п. После этого врач назначает определенные методы диагностики.

Кожные пробы

Обследование методом укола (прик-тестирование) или царапины (скарификационный тест) проводится для того, чтобы определить, какие аллергены могут иметь значение в развитии симптомов у конкретного человека. Это абсолютно безболезненные методы. Разница между ними несущественна, первый метод считается более безопасным.

Исследование, как правило, проводят на коже предплечья, которую предварительно обрабатывают спиртовым раствором. Далее, на чистую кожу наносят капли аллергенов. В случае скарификационных тестов, через капли аллергенов, одноразовым скарификатором, наносятся небольшие царапины. В случае прик-тестов используют одноразовые иглы, ими наносят легкие уколы (на один миллиметр в глубину). И в том, и в другом случае кровеносные сосуды не задеваются, то есть оба метода бескровные. Не ставят более 15 проб с аллергенами за один раз. Через некоторое время возможно развитие небольшого отека и покраснения кожи, что предполагает аллергию на соответствующее вещество.

Исследование специфических антител Ig E

Такой анализ на антитела, ответственных за развитие аллергии, помогает установить группу причинных аллергенов. Метод очень чувствительный, а полученная информация является по своей сути схожей с той, что получена в результате кожного тестирования. Для проведения этого анализа нужно будет сдать кровь из вены.

Провокационные тесты

Кожное тестирование и исследование крови на IgE указывают на те аллергены, которые потенциально могут вызвать аллергические реакции у данного человека. Если после кожных проб и исследования крови, диагноз остается неясным, врач может назначить провокационные тесты. Такие исследования проводятся в аллергологических стационарах по строгим показаниям. При проведении провокационных тестов в нос, под язык или непосредственно в бронхи вводится небольшое количество аллергена, а через некоторое время оценивается реакция. Такое исследование может вызывать у больного сильную аллергическую реакцию, поэтому должно проводиться в присутствии врача, который может оказать немедленную медицинскую помощь.

Элиминационные тесты

Если контакт с аллергеном постоянный, то для подтверждения того, что данный конкретный аллерген вызывает клинические проявления аллергии, используют элиминационные тесты. Элиминация - это удаление аллергена. Типичный пример элиминационного теста - элиминационная диета. Это диагностический прием, который заключается в полном выведении из рациона предполагаемого аллергенного продукта. Если после исключения продукта в течение 7 - 14 дней наступает видимое улучшение течения болезни, то можно говорить о том, что этот продукт является причиной аллергии.

Для диагностики аллергии и коррекции лечения врач может попросить вести специальный дневник, в котором больной будет отмечать время начала аллергии, проявления и возможную причину. Это позволить назначить профилактическое лечение или исключить контакт с аллергеном, например, в случае с аллергией на пыльцу или пищевой аллергией.

Лабораторные методы диагностики аллергии - это всего лишь часть комплексного аллергологического обследования. На их основании врач может предположить причину аллергии. Точный диагноз можно поставить только при совокупности всех данных: опроса, осмотра, лабораторных данных и реакции на лечение.

Специфические методы аллергологической диагностики

Кожные пробы

Кожные пробы нашли самое широкое применение как метод определения аллергена. Метод малотравматичен, относительно безопасен и довольно специфичен (т. е. с высокой долей достоверности можно определить причинный аллерген). Сочетание тщательно собранного анамнеза с хорошо продуманной обширной программой кожных проб является основой диагностического подхода к аллергологическим проблемам. В основном кожные пробы применяются для выявления специфических аллергенов при заболеваниях, вызванных реакциями гиперчувствительности немедленного типа (I тип). К таковым можно отнести аллергический ринит, астму, атопическую экзему, анафилаксию, крапивницу. На кожу больного воздействуют небольшим количеством аллергена, чем вызывают развитие аллергической реакции в миниатюре. Кожные пробы ставят, как правило, в период ремиссии. Методики выполнения кожных проб могут быть различны: насечки, уколы, внутрикожное введение аллергена, лекарственный электрофорез. Таким образом, по выбранному методу проба может быть кожной и внутрикожной. Основными целями кожных проб являются:

– выявление основных аллергенов, не установленных по данным анамнеза аллергического заболевания;

– подтверждение наличия аллергенов, предполагаемых на основании данных аллергологического анамнеза.

Метод кожных проб основан на наличии антител не только в шоковом органе, но и в коже (реагины). Поэтому при встрече с «родственным» аллергеном происходит аллергическая реакция с высвобождением гистамина и образованием волдыря или воспалительной аллергической гиперемии. В настоящее время известно большое количество диагностических аллергенов как инфекционного, так и неинфекционного ряда. Кожные пробы противопоказаны в период обострения аллергического заболевания, основного (неаллергического) заболевания, во время лечения гормонами и антигистаминными препаратами (так как эти медикаменты могут искажать (снижать) кожную чувствительность). Интенсивность кожных проб оценивают либо плюсами (от 0 до 4), либо по диаметру «пуговки», или очага гиперемии (покраснения кожи).

Учитывая возможность развития серьезных осложнений, вплоть до анафилактического шока, при несоблюдении техники постановки кожных проб, а также сложность интерпретации полученных результатов, проведение кожных проб возможно только в аллергологических кабинетах специально обученным персоналом под наблюдением врача-аллерголога.

Провокационные пробы

Помимо кожных проб, для диагностики в аллергологии широко используются провокационные пробы в виде специальных тестов. При помощи провокационных проб (тестов) выявляют (уточняют) причиннозначимый аллерген. В основе тестов лежит введение аллергена в шоковый орган. Если аллерген причиннозначим, значит, происходит реакция аллергического воспаления. Шоковым органом называется тот орган, поражение которого является ведущим в картине заболевания. По виду шокового органа выделяют следующие виды провокационных проб:

I. Конъюнктивальный провокационный тест, применяемый для выявления аллергенов, вызывающих развитие аллергического конъюнктивита или поллиноза, протекающего с явлениями конъюнктивита. Необходимо соблюдать осторожность при его проведении из-за опасений вызвать резкую воспалительную реакцию. Противопоказания те же, что и для кожных проб. В конъюнктивальный мешок, отодвинув нижнее веко, закапывают несколько капель тест-контрольной жидкости. Затем веки можно сомкнуть. При отсутствии воспалительной реакции закапывают капли аллергена (в разведении). При появлении зуда, воспаления век, слезотечения тест считается положительным.

II. Назальный провокационный тест считается наиболее безопасным. Проводится преимущественно при поллинозах с клиническими проявлениями ринита и аллергических ринитах. Эта проба проста и легковыполнима в условиях аллергологического кабинета. Противопоказания – как и у кожных проб. Аллерген (после предварительного введения тест-контрольной жидкости) в соответствующем разведении закапывают в одну половину носа. При положительной реакции появляются чиханье, зуд в носу, затрудненное дыхание через данную половину носа. При специальном осмотре слизистой данной половины носа (при риноскопии) можно определить набухание слизистой оболочки носа, сужение носового прохода.

III. Ингаляционный провокационный тест обычно применяется для специфической диагностики различных форм бронхиальной астмы. Тест выполняется строго в условиях стационара, так как возможно развитие тяжелого приступа бронхиальной астмы сразу или через несколько часов, поэтому за тестируемым необходимо наблюдение. Этот тест наиболее специфичен (т. е. с большой достоверностью позволяет выявить причиннозначимый аллерген), так как аллерген вводят естественным путем. Для того чтобы аллерген попал на слизистую оболочку дыхательных путей, он должен быть распылен, после чего больной вдыхает его. В ответ на попадание аллергена в шоковый орган (легкие) возникает бронхоспазм, который свидетельствует о причинной значимости аллергена. Детям этот тест проводят лишь с 4-5 лет с большой осторожностью и предварительной подготовкой. Для снятия возникшего во время исследования бронхоспазма необходима ингаляция одного из бронхоспазмолитических препаратов («беротек», «вентолин» и др.).

Существуют и другие виды провокационных тестов, такие как холодовой, тепловой, лейкоцитопенический, тромбоцитопенический, экспозиционные.

С помощью провокационных тестов хорошо выявляются атопический и иммунологический типы аллергических реакций. Труднее диагностируется аллергическая реакция замедленного типа.

Элиминационные пробы

Это способ выявления возбудителя аллергии (причиннозначимого аллергена) основан на исчезновении или ослаблении аллергической реакции после прекращения контакта больного с аллергеном. Элиминационные тесты были предложены для диагностики пищевой аллергии и нашли широкое применение в детской практике. Как показывает само название, проба связана с исключением из диеты больного подозреваемого аллергена. Необходимо исключить из рациона не только подозреваемый аллерген в чистом виде, например яйцо, но и блюда, содержащие его (булки, печенье, кремы, омлеты и т. д.). Второе необходимое условие чистоты эксперимента – это длительность элиминации (не менее 7-12 дней). Обычно элиминационный тест используется в диагностике пищевой и (реже) лекарственной аллергии. После наступления ремиссии (исчезновение проявления болезни) этот тест сочетают с применением провокационного теста с данным аллергеном.

Лабораторные методы диагностики

Лабораторные методы диагностики аллергических заболеваний в отличие от вышеперечисленных клинических методов диагностики имеют ряд преимуществ, так как не связаны с введением подозреваемого аллергена в высокочувствительный организм. А значит, они полностью безопасны для пациентов. Приоритетное значение лабораторные методы диагностики имеют тогда, когда не удается добиться периода ремиссии, а выявить аллерген крайне необходимо.

При использовании методов лабораторной диагностики (другими словами, иммунологических методов исследования) необходимо учитывать некоторые положения. Во-первых, все иммунологические методы диагностики выявляют лишь состояние сенсибилизации, т. е. свидетельствуют о том, что у данного человека когда-то уже был контакт с данным аллергеном. Из этого вовсе не следует, что именно на данный аллерген разовьется аллергическая реакция, потому что для реализации аллергии необходим еще ряд дополнительных условий. Во-вторых, у разных типов иммунологических реакций имеются различные иммунологические механизмы, поэтому для диагностики необходимо применять несколько методов. К наиболее простым методам относятся методы, основанные на реакциях клеток крови, так как клетки крови могут быть носителями антител (лимфоциты) и фиксировать на себе комплекс «антиген – антитело» (тромбоциты, эритроциты, зернистые лейкоциты, базофилы). На этих свойствах клеток крови основаны некоторые методы лабораторной диагностики, например тест на выброс веществ воспаления из базофильных лейкоцитов, тучных клеток соединительной ткани и др. Диагностическая значимость указанных методов далеко не равнозначна. Их применение определяется задачами исследования, характером процесса и другими факторами. Итак, подытоживая все вышесказанное, ответим на вопрос: как же распознать аллергию? Как уже отмечалось, часто распознавание аллергических реакций и заболеваний не представляет большой трудности. Когда больной обращается за медицинской помощью, ему необходимо рассказать доктору:

– о характере течения заболевания и его тяжести;

– о своих жалобах, т. е. о субъективных ощущениях;

– о том, как протекают приступы аллергии – сезонно или непрерывно;

– о том, на какие виды пищевых продуктов и лекарств бывают аллергические реакции;

– о том, есть ли дома домашние животные, птицы, аквариум, имеется ли и с какой частотой контакт с пылью, косметическими средствами, инсектицидами и т. д.;

– о состоянии пищеварительного тракта (есть ли запоры, поносы);

– о том, бывают ли и как часто головные боли, охарактеризовать их длительность и локализацию;

– об очагах хронической инфекции (хронический гайморит, отит, кариозные зубы, наличие глистной инвазии, лямблиоза и т. д.);

– обо всех перенесенных болезнях и лекарствах, которыми их лечили, о реакциях на инъекции иммуноглобулинов; о наличии или отсутствии в анамнезе жизни (т. е. в истории жизни) внутривенных переливаний крови и ее препаратов.

Заключение о типе процесса и его причине дается на основе обобщенных результатов анамнеза, клинического обследования и указанных методов исследования.

Из книги Секреты целителей Востока автора Виктор Федорович Востоков

Методы диагностики На протяжении многовекового развития народной медицины восточные целители разработали своеобразные методы обследования больных и диагностирования болезней. Многие из этих методов используются и в современной медицине.Вначале их было четыре:

Из книги Мы хотим ребенка. 100% беременность! автора Елена Михайловна Малышева

СОВРЕМЕННЫЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ Как и в любой другой болезни, лечение бесплодия во многом зависит от своевременной и правильной постановки диагноза. К счастью, на сегодняшний день диагностика бесплодия в семье представляет собой тщательно изученный и отработанный

Из книги Болезни молочной железы. Современные методы лечения автора Елена Витальевна Потявина

Современные методы диагностики Известно, что рак не возникает внезапно, а спустя 5, 10, а то 20 лет после предшествующих хронических заболеваний. По данным Санкт-Петербургского ГУН НИИ онкологии имени профессора Н. Н. Петрова, рак молочной железы развивался на почве

Из книги Болезни желудка и кишечника автора Юлия Попова

Методы диагностики Для точной постановки диагноза эффективен комплексный подход. Он позволяет установить тяжесть заболевания, локализацию поражения кишечника, степень и характер изменений. Для этого используют ректороманоскопию, колоноскопию, ректороманобиопсию,

Из книги Заболевания позвоночника. Полный справочник автора Автор неизвестен

МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ ОСТЕОПОРОЗА К таким методикам прежде всего относят инструментальные и лабораторные методы исследований.Рентгенологическое исследование костей. Данная методика информативна лишь при изменениях, когда костная масса уже потеряна на 1/5-1/3 своей

Из книги Общая хирургия: конспект лекций автора Павел Николаевич Мишинькин

3. Основные методы лечения столбняка. Специфические и неспецифические методы лечения К неспецифическим методам лечения относится ряд мероприятий. В первую очередь это госпитализация больного в специализированный стационар с обязательным помещением в отдельную палату

Из книги Грыжа позвоночника. Безоперационное лечение и профилактика автора Алексей Викторович Садов

Методы диагностики Вероятнее всего, что к врачу вас приведет боль. Боль, которая вымотала вас и с которой непонятно, что делать. Остальное мы будем по привычке терпеть и до последнего откладывать визит к доктору, что, конечно, не может вызвать одобрения и достойно

Из книги Диагностика в тибетской медицине автора Светлана Чойжинимаева

Дополнительные методы диагностики При ощупывании тела пациента врач тибетской медицины выявляет болезненность точек акупунктуры, соответствующих и связанных энергетически с теми или иными внутренними органами. Эти точки располагаются на меридианах, которые являются

Из книги Ишемическая болезнь сердца. Жизнь продолжается автора Елена Сергеевна Киладзе

Инструментальные методы диагностики Выбор диагностических методов, а также последовательность процедур определяет только лечащий врач. Я познакомлю вас с наиболее распространенными методами диагностики ишемической болезни сердца, расскажу, как их выполняют и как к

Из книги Рак желудка и кишечника: надежда есть автора Лев Кругляк

Лабораторные методы диагностики Организм человека – одна из самых сложных и совершенных систем живой природы, нормальная жизнедеятельность которого требует достаточно жесткого постоянства его внутренней среды. Процессы, происходящие в клетках и тканях организма,

Из книги Аллергия автора Наталья Юрьевна Онойко

НОВЕЙШИЕ МЕТОДЫ ДИАГНОСТИКИ Радионуклидные методы весьма перспективны (имеется в виду создание опухолеспецифических меченых антител). В настоящее время для диагностики метастазов применяют сцинтиграфию костей скелета, мозга, легких, для характеристики

Из книги Гипертония автора Дарья Владимировна Нестерова

Клинические методы диагностики К клинической диагностике можно отнести сбор анамнеза, т. е. истории заболевания аллергией. Сбор аллергологического анамнеза является первой возможностью для врача и больного установить между собой хорошее взаимопонимание. Эффективные

Из книги Гипотония автора Анастасия Геннадьевна Красичкова

Современные методы диагностики гипертонии Диагностика гипертонии проводится в лечебном учреждении. Опросив и осмотрев больного, врач измеряет его АД (как правило, измерения проводятся в течение нескольких дней и даже недель подряд), назначает лабораторные анализы и,

Из книги Конспект лекций по туберкулезу автора Елена Сергеевна Мостовая

Методы диагностики гипотонии Современная медицина имеет в своем арсенале несколько методов диагностики артериальной гипотензии, позволяющих с уверенностью сделать вывод о наличии и степени тяжести заболевания. Наиболее точный результат достигается при сочетании

Из книги автора

Вопрос 24. Методы диагностики туберкулеза 1. Выявление новых случаев туберкулеза возможно различными способами, в последние годы доля каждого из них заметно меняется. Неоднозначна и точка зрения на то, как лучше выявлять туберкулез. Остановимся на большинстве известных

Из книги автора

Вопрос 25. Методы диагностики туберкулеза Частота выявления «виражных» детей и подростков, так же как и инфицированность населения (процент положительно реагирующих на туберкулин людей среди всех, кому проведена туберкулиновая проба), отражают эпидемиологическую

15.1. Характеристика микробиологических и иммунологических лабораторий

Вся работа с микробами проводится в лабораториях, которые в зависимости от основных задач могут быть научно-исследовательскими, диагностическими или производственными.

В системе органов здравоохранения имеются:

Клинико-диагностические лаборатории общего или специального (биохимическая, бактериологическая, иммунологическая, цитологическая и др.) типов, входящие в состав больниц, поликлиник, диспансеров и других лечебно-профилактических учреждений;

Бактериологические лаборатории Госсанэпиднадзора (ГСН);

Санитарно-бактериологические лаборатории ГСН;

Санитарно-химические лаборатории ГСН;

Центральные (ЦНИЛ), проблемные, отраслевые, учебные лаборатории вузов;

Специализированные лаборатории (особо опасных инфекций и др.).

В настоящее время лаборатории и более крупные лабораторные учреждения (отделы, институты, производственные предприятия), как правило, специализированные и работают с той или иной группой микробов.

С вирусами работают в вирусологических лабораториях, располагающих соответствующим оборудованием и использующих спе- циальные методы исследования. Существуют микологические и протозоологические лаборатории. Специализированный характер

приобретают и бактериологические лаборатории, в которых работа концентрируется на определенных группах бактерий, например риккетсиозные, туберкулезные, лептоспирозные, анаэробные и др. Иммунологические исследования проводятся в иммунологических лабораториях, хотя отдельные виды исследований могут выполняться и в микробиологических лабораториях, например серодиагностика инфекционных болезней.

Лабораторная работа с патогенными микробами проводится в специально оборудованных лабораториях, обеспечивающих режим работы и технику безопасности, исключающих возможность заражения персонала и утечку микробов за пределы лаборатории.

Необходимость четкой регламентации условий работы с микробами, в различной степени опасными для сотрудников ла- бораторий и окружающего населения, обусловила разработку классификации микробов, разбив их на 4 группы по степени их биологической опасности (классификация ВОЗ). В России в соответствии с рекомендациями ВОЗ патогенные микробы также делят на 4 группы: 1-я группа - возбудители особо опасных инфекций; 2-я группа - возбудители высококонтагиозных эпидемических заболеваний человека; 3-я группа - возбудители инфекционных болезней, выделяемые в самостоятельные нозологические группы; 4-я группа - условно-патогенные микробы - возбудители оппортунистических инфекций. Нумерация групп микробов, принятая в России, отличается обратным порядком от классификации ВОЗ, где к 1-й группе относятся микробы самой низкой патогенности, а к 4-й группе - особо опасные.

В соответствии с делением микробов на группы по степени биологической опасности лаборатории также делят на категории. По номенклатуре ВОЗ выделяют 3 категории микробиологических лабораторий:

Базовые (основные или общего типа) лаборатории, которые в связи с конкретными особенностями работы могут быть оборудованы различными защитными устройствами;

Режимные (изолированные) лаборатории и лаборатории особого режима (максимально изолированные).

Безопасность работ в лабораториях всех категорий обеспечивается выполнением распорядка и правил работы в лаборатории, выполнением требований к лабораторным помещениям и их оснащению, обеспечением лабораторий соответствующим оборудова-

нием, медицинским наблюдением за состоянием здоровья сотрудников, обучением и тренировкой персонала технике безопасности в лаборатории.

15.2. Оснащение микробиологических и иммунологических лабораторий

Помещения базовой лаборатории должны быть просторными для обеспечения безопасного проведения лабораторной работы. Стены, потолок, пол должны иметь гладкую, легко моющуюся поверхность, непроницаемую для жидкостей, устойчивую к дезинфектантам, обычно используемым в лаборатории. Поверхность рабочих столов должна быть водонепроницаемой, устойчивой к дезинфектантам, кислотам, щелочам, органическим растворителям и умеренному нагреванию. Лабораторная мебель должна быть прочной. Пространство под столами и между мебелью должно быть легкодоступно для уборки. В лаборатории должен находиться автоклав для обеззараживания отходов.

Оборудование базовой лаборатории должно ограничивать или предупреждать контакт микробиолога с инфекционным матери- алом, должно быть изготовлено из прочных материалов, непроницаемых для жидкостей, устойчивых к коррозии. Оборудование должно быть сконструировано и установлено так, чтобы оно легко подвергалось чистке, обеззараживанию и проверке.

Лабораторию оснащают микроскопом, автоклавом, термостатами, сушильными, стерилизационными шкафами, аппаратом для свертывания сыворотки, дистиллятором, центрифугами, лабораторными весами, рН-метром, ФЭК, магнитной мешалкой, моечной ванной.

Рабочие помещения лаборатории должны быть снабжены подводкой холодной и горячей воды, электричеством, вакуумом, кис- лородом, воздухом высокого давления и т.п. В некоторых кабинетах оборудуются боксы и вытяжные шкафы.

В число обязательных помещений входят лаборатории кишечных, капельных инфекций, санитарно-бактериологическая, се- рологическая, а также вспомогательные помещения: средоварка, моечная, стерилизационная (чистая и грязная), регистратура, кладовые, санузел для сотрудников, виварий. В лабораториях с пунктами для обследования на носительство микроорганизмов дополнительно оборудуют приемную, процедурную, туалеты для забора

материала. Располагают помещения таким образом, чтобы грязный и чистый потоки не перекрещивались и не соприкасались.

В отношении помещений режимных лабораторий должны соблюдаться те же требования, которые предусмотрены для базовой лаборатории. Кроме того, лаборатория этого типа должна быть отделена от тех частей здания, где передвижение сотрудников не ограничивается. Устройства для мытья рук должны быть снабжены приспособлениями для открывания воды ножной педалью или локтем. Окна должны быть закрыты и заклеены. Входные двери в лабораторные помещения должны быть самозакрывающимися и запирающимися на замок. Вытяжная вентиляция проектируется так, чтобы наиболее низкое давление создавалось в помещениях самой высокой опасности инфицирования. В этом случае движение воздуха будет происходить из вспомогательных помещений в направлении основного рабочего помещения. Отработанный воздух выбрасывается в окружающую среду только после фильтрации через бактериальные фильтры. При оснащении режимных лабораторий оборудованием руководствуются рекомендациями, разработанными для базовых лабораторий, с тем дополнением, что вся работа с инфекционным материалом в них проводится в защитных боксах. В режиме максимально изолированных лабораторий существует ряд особенностей для обеспечения максимальной биологической безопасности персонала, населения и окружающей среды. Вход в лабораторию и выход из нее осуществляются через санитарный пропускник. При входе обязательно полное переодевание в специальную одежду, при выходе перед переодеванием обязательна целевая санитарная обработка (душ, дезинфектанты) персонала. Для снижения риска попадания инфекционного мате- риала в окружающую среду применяют боксирование. С помощью боксов (настольных, ламинарных) создают физические барьеры для предотвращения возможных контактов работающего персонала с инфекционным материалом.

15.3. Правила работы в микробиологической лаборатории

Основные правила работы в базовой лаборатории включают:

Запрет работ с пипеткой при помощи рта;

Запрет приема пищи, питья, курения, хранения пищи и применения косметических средств в рабочих помещениях;

Поддержание чистоты и порядка;

Дезинфекцию рабочих поверхностей не реже 1 раза в день и после каждого попадания на них заразного материала;

Мытье рук персоналом после работы с заразным материалом, животными, перед уходом из лаборатории;

Проведение всех работ таким образом, чтобы свести к минимуму возможность образования аэрозоля;

Обеззараживание всех инфицированных материалов перед выбросом или повторным использованием.

15.4. Принципы микробиологической диагностики инфекционных болезней

Наиболее важное место в лабораторной диагностике инфекционных болезней занимает специфическая микробиологическая диагностика, которую проводят в бактериологической, вирусологической, иммунологической и других лабораториях. Она состоит из трех этапов: преаналитического, аналитического и постаналитического.

Первым этапом микробиологической диагностики является преаналитический, включющий взятие материала для исследования. Выбор исследуемого материала определяется патогенезом и клинической картиной инфекционного заболевания. Исследуемый материал берут по возможности в асептических условиях, помещают в стерильную посуду и как можно быстрее доставляют в лабораторию (желательно в течение 1 ч). В некоторых случаях посев материала проводят у постели больного. Иногда допускается непродолжительное хранение материала в регламентированных условиях. Исследуемый материал сопровождается документом, в котором обязательно указываются время взятия, характер материала, его источник и точно определяется цель исследования.

Материалом для исследования в медицинской микробиологии служат различные биологические и патологические жидкости организма (кровь, гной, моча, мокрота, ликвор, испражнения, рвотные массы, промывные воды и т.п.) и ткань - материал биопсии от живого или аутопсии от трупа. В санитарной микробиологии на исследование берут объекты окружающей среды (воздух, воду, пищевые продукты и т.п.) или смывы с них. При заборе материа-

ла для микробиологического исследования необходимо соблюдать следующие правила:

Материал берут непосредственно из очага инфекции или исследуют соответствующее отделяемое (гной, мочу, желчь и т.п.);

Количество материала должно быть достаточным для проведения исследования и его повторения в случае необходимости;

Материал берут по возможности в начальном периоде болезни, так как именно в этот период возбудители выделяются чаще, их больше, они имеют более типичную локализацию;

Материал берут до начала антимикробной химиотерапии или через определенный промежуток времени после приема антибактериального препарата, необходимый для его выведения из организма;

Следует предупредить возможность попадания в материал антимикробных препаратов (дезинфектанты, антисептики, антибиотики);

Транспортировку материала в лабораторию следует проводить в максимально короткие сроки, в условиях, исключающих гибель неустойчивых видов микробов, или помещать его в специальные транспортные среды;

При транспортировке должны соблюдаться все правила биологической безопасности;

К материалу прилагают сопроводительный документ, содержащий основные сведения, необходимые для проведения микробиологического исследования (фамилия, имя, отчество больного, номер истории болезни, клинический диагноз и т.д.).

15.5. Методы микробиологической диагностики

Аналитический этап включает микроскопический, культуральный, биологический, серологический и аллергологический методы микробиологической диагностики.

Микроскопический метод заключается в приготовлении препаратов (нативных или окрашенных простыми или сложными методами) из исследуемого материала и их микроскопии с применением различных видов микроскопической техники (световая, темнопольная, фазово-контрастная, люминесцентная, электронная и др.). В бактериологии микроскопический метод получил название бактериоскопического, в вирусологии - вирусоскопического.

Культуральный метод заключается в посеве исследуемого материала на искусственные питательные среды, культуры клеток или куриные эмбрионы с целью выделения и идентификации чистой культуры возбудителя или возбудителей. В бактериологии культуральный метод получил название бактериологического, в микологии - микологического, в протозоологии - протозоологического, в вирусологии - вирусологического.

Биологический метод (экспериментальный или биопроба) заключается в заражении исследуемым материалом чувствительных лабораторных животных или других биологических объектов (куриные эмбрионы, культуры клеток). Его используют для выделения чистой культуры возбудителя, определения типа токсина, активности антимикробных химиотерапевтических препаратов и т.д.

Серологический метод заключается в определении титра специфических антител в сыворотке крови больного, реже - в обнаружении микробного антигена в исследуемом материале. С этой целью используются иммунные реакции.

Аллергологический метод заключается в выявлении инфекционной аллергии (ГЗТ) на диагностический микробный препараталлерген. С этой целью ставят кожные аллергические пробы с соответствующими аллергенами.

Диагностическая ценность этих методов неравнозначна. Ведущим методом микробиологической диагностики является бак- териологический метод, так как он позволяет выделять и иден- тифицировать микроб-возбудитель, т.е. первопричину болезни. Остальные методы менее информативны, так как они позволяют обнаружить в организме изменения, обусловленные наличием в нем микроба. Второе место по значимости занимает серологический метод, поскольку взаимодействие антигена и антитела характеризуется высокой степенью специфичности. Информативность трех остальных методов невысокая, и они обычно служат дополнением к бактериологическому и серологическому методам. Так, микроскопия исследуемого материала далеко не всегда позволяет увидеть и идентифицировать микробы под микроскопом. Их удается обнаружить только при высокой обсемененности ими материала. Даже обнаружив бактерии под микроскопом, идентифицировать их до вида морфологически нельзя. Как известно, все видовое многообразие бактерий сводится к 4 основным морфологическим формам: кокки, палочки, извитые и ветвящиеся формы. Поэтому по микро-

скопической картине можно весьма ориентировочно отнести увиденные бактерии к крупному таксону, например грамположительным коккам. Только в единичных случаях, когда бактерии имеют уникальную морфологию, микроскопически можно определить их родовую принадлежность. Информативность микроскопического метода грибов и простейших выше, так как грибы и простейшие, являясь эукариотами, имеют более крупные размеры и более характерную морфологию.

Диагностические возможности биологического метода ограничены тем, что к большинству возбудителей антропонозных инфек- ций человека лабораторные животные невосприимчивы, поэтому вызвать у них экспериментальную инфекцию не представляется возможным.

Возможности аллергологического метода ограничены тем, что большинство микробов в организме человека не вызывают ГЗТ.

Поскольку микробиологические исследования являются одним из наиболее дорогих видов лабораторных исследований, перед ми- кробиологом стоит задача постановки достоверного микробиологического диагноза с наименьшей затратой времени, сил и средств. Поэтому для постановки диагноза используют 1-5 методов диагностики, чтобы выбранный набор методов гарантировал правильность ответа.

Особое значение приобретают методы экспресс-диагностики, которые позволяют поставить микробиологический диагноз в течение короткого промежутка времени (от нескольких минут до нескольких часов) с момента доставки исследуемого материала в лабораторию. К числу экспресс-методов относятся РИФ, ИФА, РИА, ПЦР, использование биочипов, хроматография и др. Особенности диагностики анаэробных инфекций изложены в материалах диска.

Наряду с традиционными классическими методами микробиологической диагностики в последние годы все большее значение приобретают молекулярно-биологические методы диагностики (ДНК-зонды, ПЦР, лигазная цепная реакция - ЛЦР, хроматография, электрофорез, иммуноблот, биочипы и др.).

Молекулярно-биологические методы диагностики основаны на идентификации ДНК и РНК, специфичных для данного вида микробов, и включают гибридизацию на основе ДНК-зондов и диагностику на основе ПЦР.

Постаналитический этап микробиологической диагностики заключается в клинической интерпретации результатов лабораторных исследований. При этом лечащий врач должен оценить этиологическое значение выделенных от больного микробов, скорректировать на основании данных микробиологического мониторинга проводимую больному эмпирическую антимикробную химиотерапию и др.

15.5.1. Методы микробиологической диагностики бактериальных инфекций

В бактериологии для обнаружения возбудителя в исследуемом материале используют бактериоскопический, бактериологический, биологический методы.

Достоинствами бактериоскопического метода являются простота, быстрота, экономичность. Однако он находит ограниченное применение, так как может быть использован лишь при наличии каких-либо морфологических или тинкториальных особенностей возбудителя и достаточном его содержании в исследуемом материале. Данный метод является ориентировочным.

Основной и самый точный метод диагностики бактериальных инфекций бактериологический, который используют почти при всех заболеваниях, несмотря на его недостатки: длительность исследования (от 4-5 дней до 2 мес), опасность (так как накапливается чистая культура возбудителя), сравнительную дороговизну. В том случае, если в исследуемом материале предполагается содержание возбудителя в достаточном количестве, посев материала производят на плотные питательные среды для получения изолированных колоний. При незначительном содержании микробов исследуемый материал прежде засевают на жидкие питательные среды - среды обогащения. Идентификацию выделенной чистой культуры производят по морфологическим, тинкториальным, культуральным, биохимическим, антигенным и токсигенным свойствам (в зависимости от вида возбудителя). Определение перечисленных свойств позволяет установить вид возбудителя. С целью эпидемиологического маркирования производят внутривидовую идентификацию выделенной культуры: определяют ее фаговар, биовар и др. Кроме того, для назначения рационального лечения, как правило, опре- деляют чувствительность выделенной культуры к антибиотикам.

При микробиологической диагностике заболеваний, вызванных условно-патогенными микробами, представителями нормальной микрофлоры, обязательным является определение количества воз- будителей в исследуемом материале.

Биологический метод неэкономичен, негуманен, поэтому находит ограниченное применение. В качестве экспериментальных животных используют белых мышей, морских свинок, кроликов, обезьян и других животных.

Диагноз инфекционного заболевания возможно установить также с помощью серологического метода, позволяющего обнаружить либо специфические антитела в сыворотке больного, либо специфические антигены непосредственно в исследуемом материале. Антитела к возбудителю заболевания появляются, как правило, к концу первой недели болезни. Невозможность обнаружить их в первые дни заболевания является серьезным недостатком метода, особенно в тех случаях, когда заболевание протекает остро. Кроме того, при многих болезнях требуются изучение антителообразования в динамике и выявление увеличения количества антител, что также не позволяет быстро поставить диагноз. Недостатком метода является и то, что с его помощью нельзя точно идентифицировать возбудителя и определить его антибиотикограмму. Но в то же время это совершенно безопасный, относительно недорогой метод, позволяющий за короткое время поставить диагноз. В настоящее время при ряде болезней определяют не только количество, но и классы иммуноглобулинов.

При некоторых заболеваниях серологический метод применяют для выявления специфических антигенов в исследуемом ма- териале. Поскольку специфические антигены, входящие в состав возбудителя, находятся в патологическом материале с первых минут болезни, этот вариант серологического метода применяют для ускоренной (в течение первого дня болезни) или даже экспрессдиагностики (в течение нескольких часов) инфекционных заболеваний.

В качестве вспомогательного при небольшой группе инфекционных заболеваний используют аллергологический метод, по- зволяющий выявить повышенную чувствительность к специфическому антигену (аллергену), которым является возбудитель заболевания.

15.5.2. Методы микробиологической диагностики вирусных инфекций

В вирусологии методы лабораторной диагностики вирусных инфекций имеют свою специфику, учитывая особенности биологии вирусов. Используются вирусоскопический, вирусологический и серологический методы лабораторной диагностики.

Вирусоскопический метод заключается в обнаружении вируса в исследуемом материале под микроскопом. Чаще используют электронный микроскоп, реже - люминесцентный. Световая микроскопия из-за ничтожно малых размеров вирусов практически не применяется. Лишь для обнаружения крупных вирусов, используя методы сверхокраски, можно применить световой микроскоп. Кроме того, с помощью светового микроскопа можно выявить внутриклеточные включения, которые образуются в пораженных клетках при некоторых инфекциях.

Вирусологический метод заключается в заражении исследуемым материалом чувствительной биологической модели (лабораторные животные, куриные эмбрионы или культуры клеток), индикации вируса и его последующей идентификации. При заражении лабораторных животных индикация вирусов производится, как правило, по клинической картине болезни, патолого-анатомическим изменениям ориентировочно и окончательно, например, с помощью реакции гемагглютинации. Эта же реакция позволяет выявить вирусы в курином эмбрионе, видимых изменений при вскрытии которого, как правило, не наблюдается. В культуре клеток наличие вируса определяют по цитопатическому действию (в том числе образованию внутриклеточных включений), гемадсорбции, феномену бляшкообразования, реакции гемагглютинации, отсутствию изменения окраски индикатора. Идентификация вируса осуществляется с помощью серологических реакций (РПГА, РТГА, РН, РСК, ИФА и др.). Вирусологический метод позволяет точно определить природу возбудителя, но он требует достаточного времени (5-7 дней и более), значительных материальных затрат и небезопасен.

Особенностью серологического метода в вирусологии является исследование парных сывороток. Первую сыворотку берут у больного в острый период в начале болезни, хранят при температуре 4-8 ?С, а вторую сыворотку берут через 10-14 дней. Сыворотки

исследуют одномоментно. О болезни свидетельствует сероконверсия, т.е. нарастание титра антител во второй сыворотке по отношению к первой. Диагностической является сероконверсия в 4 раза и выше. Так как многие вирусные болезни протекают остро, этот вариант серологического метода обычно применяют для ретроспективной диагностики.

Ведущим методом лабораторной диагностики вирусных инфекций является вирусологический.

Ускоренная и экспресс-диагностика вирусных болезней производится так же, как при бактериальных инфекциях.

15.5.3. Особенности микробиологической диагностики микозов

Для диагностики грибковых инфекций обычно используют микроскопический метод. Микологический метод заключается в по- севе патологического материала на специальные питательные среды, выделении чистой культуры возбудителя и ее идентификации по морфологическим, культуральным и биохимическим свойствам. Особенностью данного метода является его продолжительность - несколько недель из-за медленного роста грибов. Обнаружение антител при серологическом исследовании возможно со 2-4-й нед болезни. При некоторых заболеваниях выявляют специфические антигены в исследуемом материале. Аллергологический метод используют редко. Нередко при микозах применяют гистологический метод, заключающийся в обнаружении элементов гриба (споры, конидиальные головки и т.п.) в органах и тканях, пораженных грибами. С этой целью готовят гистологические тонкие или ультратонкие срезы тканей, окрашивают их специальными гистологическими и гистохимическими методами и исследуют с применением световой, а в случае необходимости и электронной микроскопии.

15.5.4. Особенности микробиологической диагностики протозойных инфекций

Микроскопическое исследование патологического материала заключается в приготовлении как нативных препаратов («толстая капля»), так и мазков, окрашенных по методу Романовского- Гимзе, и является основным методом диагностики заболеваний, вызванных простейшими. В некоторых случаях применяют серологический и аллергологический методы диагностики.

15.6. Принципы иммунологической диагностики болезней человека

Иммунодиагностика - раздел иммунологии, изучающий и разрабатывающий методы диагностики инфекционных и неинфекци- онных болезней, связанных с функцией иммунной системы.

Многие инфекционные заболевания в настоящее время претерпели существенные изменения, что выражается в увеличении удельного веса легких, стертых и бессимптомных форм, росте аллергического компонента, высокой частоте микст-инфекций. Это затрудняет традиционную диагностику заболеваний, поэтому значимость иммунодиагностики, направленной на поиск антигенов возбудителя или специфических иммунных сдвигов в организме больного, возрастает.

Под иммунореактивностью (иммунный статус, иммунный профиль) понимают способность иммунной системы к иммунному ответу в данный момент времени. Ее характеризуют концентрация иммуноглобулинов, количество лимфоцитов и лейкоцитов, соотношение Т- и В-клеток и функциональные показатели, в частности способность иммунокомпетентных клеток отвечать на стимуляцию.

15.7. Контроль качества лабораторных исследований

Важным элементом работы микробиологической и иммунологической лаборатории является получение точных и сопоставимых результатов анализов, для чего необходимо осуществлять контроль качества проводимых исследований. Контроль качества может быть внутрилабораторным и внешним.

Внутрилабораторный контроль качества - система контрольных мер, которые проводятся в отдельной лаборатории персоналом этой лаборатории и направлены на обеспечение соответствующего качественного уровня работы лаборатории.

Внешний контроль качества - система контрольных мер, которые проводятся в рамках единой Федеральной системы внешней оценки качества (ФСВОК) лабораторных исследований группами экспертов и направлены на обеспечение правильной организации технологических процессов производства лабораторных исследований.

Федеральная система внешней оценки качества лабораторных исследований состоит из разделов, в рамках каждого из которых

выполняется оценка качества определенного вида лабораторных исследований. В структуру ФСВОК входят экспертные группы по разработке и проведению внешнего контроля качества в различных видах лабораторных исследований.

Задания для самоподготовки (самоконтроля)

A. Назовите метод микробиологического исследования, позволяющий установить вид возбудителя:

1. Аллергический.

2. Микроскопический.

3. Культуральный.

4. Биологический.

Б. Назовите основную задачу бактериологического метода исследования.

B. У больного с подозрением на вирусную инфекцию на 7 день заболевания была взята сыворотка, в которой обнаружены специфические противовирусные антитела. Оцените достоверность полученного результата исследования.

Г. Назовите тип лаборатории, в которую следует направить материал от больного с подозрением на особо опасную инфекцию.

Оглавление темы "Методы обнаружения микроорганизмов. Микробиологическое исследование.":









Серологические методы исследований выявления специфических AT и Аг возбудителя - важный инструмент в диагностике инфекционных заболеваний. Особую ценность они имеют в тех случаях, когда выделить возбудитель не представляется возможным. При этом необходимо выявить повышение титров AT, в связи с чем исследуют парные образцы сыворотки, взятые в интервале 10-20 сут (иногда этот интервал может быть более длительным). AT обычно появляются в крови на 1-2-ю неделю заболевания и циркулируют в организме относительно долго, что позволяет использовать их выявление для ретроспективных эпидемиологических исследований. Определение классов Ig чётко характеризует этапы инфекционного процесса, а также может служить косвенным прогностическим критерием, Особое значение имеют методы выявления микробных Аг. В значимых количествах они появляются уже на самых ранних сроках, что делает их идентификацию важным инструментом экспресс-диагностики инфекционных заболеваний, а количественное их определение в динамике инфекционного процесса служит критерием эффективности проводимой антимикробной терапии.

Аллергологические методы исследования

Антигены многих возбудителей обладают сенсибилизирующим действием, что используют для диагностики инфекционных заболеваний, а также при проведении эпидемиологических исследований. Наибольшее распространение нашли кожно-аллергические пробы, включающие внутри-кожное введение Аг (аллергена) с развитием реакции ГЗТ. Кожные пробы нашли применение в диагностике таких заболеваний как сап, мелиоидоз, бруцеллёз. Наиболее известна проба Манту, используемая как для диагностики туберкулёза, так и для оценки невосприимчивости организма к возбудителю.

Всем больным, страдающим атопическим дерматитом, должно быть как можно раньше проведено аллергологическое обследование, которое практически не имеет противопоказаний, за исключением обострения основного или других заболеваний. Диагностику следует проводить также в случае наличия у пациента других «аллергосимптомов» (эпизоды персистирующего кашля, в том числе ночью, после физической нагрузки; зуд и отек глаз и/или заложенность носа, насморк и т. п.). Аллергологическое обследование является обязательным для тех больных, которым предполагается назначить профилактическое лечение (специфическую иммунотерапию/аллерговакцинацию).

В целом аллергодиагностика имеет неоценимо важное значение с целью:
а) ранней идентификации детей из группы риска развития аллергических заболеваний;
б) назначения больному специфической терапии, в том числе элиминационной, соответствующей фармакотерапии, специфической иммунотерапии (аллерговакцинации).

У детей объем аллергологического обследования зависит от их возраста, семейной отягощенности атопией, провоцирующих факторов, симптомов заболевания и т.

п. История болезни включает данные о наследственной предрасположенности к аллергическим заболеваниям, погрешностях в питании беременной/кормящей матери, профессиональных вредностях у родителей, сроках введения прикорма и реакций на новый вид пищи у ребенка. Врач тщательно анализирует частоту и тяжесть симптомов заболевания, факторы окружающей среды (жилищно-бытовые условия, наличие животных, птиц, рыб в квартире, курение и т. д.), уточняет связь клинических проявлений с определенным сезоном года, местом пребывания ребенка (школа, вне дома); выявляет другие сопутствующие атопические заболевания (пищевая аллергия, аллергический ринит/конъюнктивит, бронхиальная астма). Особое внимание обращают на специфический аллергологический анамнез, который необходимо использовать для дальнейшей коррекции противоаллергической терапии, а также на аллергологический анамнез тех больных, у которых были выявлены позитивные кожные пробы. Врачи могут пользоваться также стандартным аллергологическим опросником.

Атопию (или IgE-сенсибилизацию) устанавливают на основании клинических симптомов заболевания и положительных кожных проб или повышенного уровня общего или специфических IgE-антител в сыворотке крови больного.

При назначении детям, страдающим атопическим дерматитом, кожных проб необходимо учитывать следующее:
в случае обострения заболевания и при локальном применении наружных кортикостероидов применение кожных проб ограничено;
следует отменить прием антигистаминных препаратов за 3 дня до постановки кожных тестов;
рекомендуется постановка кожных проб с использованием прик-метода. По мнению зарубежных исследователей, считается ошибочной рекомендация ограничить их постановку у детей до 3 лет. Результаты прик-тестов в значительной степени зависят от используемого экстракта и давления ланцета на кожу;
атопия считается доказанной при наличии хотя бы одной положительной пробы (средний диаметр папулы > Змм при негативном контроле) или > 2 баллов при серологическом обследовании.

По положительным результатам аллергологического обследования можно говорить лишь о том, что индивид сенсибилизирован. Эти данные приобретают высокую диагностическую значимость только при сопоставлении с историей болезни и клиническими симптомами. Сравнительный анализ чаще всего подтверждает наличие у больных атопией строгой корреляции между высоким уровнем специфических IgE-антител сыворотки крови и клиникой заболевания. Применительно к атопическому дерматиту результаты кожного аллергологического обследования зависят от возраста ребенка, используемых методов диагностики и степени тяжести заболевания.

У детей в возрасте до 3-4 лет одним из основных провоцирующих факторов развития атопического дераматита считается пищевая аллергия. В раннем возрасте чаще всего она проявляется кожными и гастроинтестинальными симптомами, крайне редко - респираторными. Основная причина пищевой гиперчувствительности - аллергия на белки коровьего молока, яиц, злаки и орехи. Дети с дермо-респираторным синдромом могут быть сенсибилизированы к ингаляционным аллергенам, и их необходимо обследовать на пылевые клещи, шерсть кошки (чаще всего).

С возрастом повышается сенсибилизация к ингаляционным аллергенам (клещи домашней пыли, аллергены животных, тараканы), позже - к внежилищным аллергенам (грибки, пыльца). Как правило, высокую частоту сенсибилизации выявляют у детей с атопической астмой и аллергическим ринитом/конъюнктивитом. Однако наболее высокий уровень сывороточного IgE отмечается у больных атопическим дерматитом по сравнению с поллинозом или бронхиальной астмой.

Типичный сезонный ринит и/или конъюнктивит (весной, летом) можно диагностировать без аллергологического обследования только на основании анамнеза больного. В дальнейшем таким пациентам обязательно проводят аллергологическое обследование с целью уточнения причинно-значимых аллергенов и назначения специфической иммунотерапии.