Положительный результат кожной иммунологической пробы. Кожные пробы на аллергены. Оценка результатов скарификационных проб

Применяют кожные тесты для выявления аллергических заболеваний, опосредованных реакциями гиперчувствительности I и IV типов. Техника выполнения кожных тестов описана в методическом письме А.Д.Адо и сотр. («Применение аллергенов неинфекионного происхождения для специфической диагностики и десенсибилизации больных аллергическими заболеваниями», М., МЗ СССР, 1969). Для кожных тестов используются стандартные аллергены, содержащие 10000 единиц белкового азота (PNU) в 1 мл. Как правило, кожные пробы ставят на внутренней поверхности предплечья. Одновременно ставят пробы с контрольной жидкостью и гистамином. При заболеваниях кожи тесты выполняют на участках, не затронутых повреждением. В настоящее время используются следующие кожные пробы: капельная, аппликационная, прик-тест, скарификационная, внутрикожная.

Капельная проба

На предварительно обезжиренную 70% спиртом кожу наносят каплю стандартного аллергена. Реакцию оценивают через 20 минут. Оценка пробы приведена в таблице 15-1.

Оценка капельной пробы

Аппликационная проба

На предварительно обработанную 70% спиртом кожу накладывают кусок марли (1 см3), смоченный раствором аллергена, и фиксируют лейкопластырем. Реакцию учитывают через 30, 60 мин, 6ч, 12ч, 24ч, 48ч, 72ч. Оценка аппликационной пробы приведена в таблице 15-2.

Оценка аппликационной пробы

Прик-тест

Прик-тест выполняется специальным prick-ланцетом. Используемое устройство позволяет стандартизовать глубину укола (1,0-1,5 мм). Укол выполняется через каплю аллергена и контрольную жидкость. Результат прик-теста учитывают через 15-20 минут. Оценка прик-теста приведена в таблице 15-3.

Оценка прик-тестов.

Скарификационная проба

На предплечье, обработанное 70% спиртом, наносят по капле 0,01% гистамина, контрольной жидкости и аллергенов (одновременно 6-10 аллергенов) на расстоянии 4-5 см друг от друга. Скарификатором через каждые капли наносят две параллельные царапины длиной 4-5 мм и расстоянием между ними 2 мм. Царапины делают поверхностными, не повреждая сосудов кожи. Через 10 минут после скарификации кожи капли промокают ватными тампонами. Пробы учитывают через 10-20 минут. Оценка скарификационных проб приведена в таблице 15-4.

Оценка скарификационных проб.

Следует помнить, что скарификационные пробы часто дают ложноположительные реакции.

Внутрикожные пробы

Выполняют, как правило, с микробными аллергенами. С неинфекционными аллергенами проводят только в случаях, когда аппликационные и скарификационные тесты дают отрицательный результат, а анамнез ясно свидетельствует об аллергии.

Техника выполнения пробы заключается в следующем: после обработки кожи предплечья или спины 70о спиртом инсулиновым шприцом внутрикожно вводят 0,02-0,1 мл аллергена. Вводимый внутрикожно аллерген должен быть в 10 раз меньшей концентрации, чем при скарификационном тестировании. В качестве контроля вводят внутрикожно контрольную жидкость и скарификационно раствор гистамина. Результаты пробы учитывают через 20 мин, 6ч, 12ч, 24ч, 48ч в соответствии со шкалой оценки, так как реакции на инфекционные аллергены могут протекать как по немедленному, так и замедленному типу.

Следует помнить, что внутрикожные пробы менее специфичны, чем накожные тесты и довольно часто дают ложноположительные и ложноотрицательные результаты. Пр внутрикожном тестировании одновременное количество исследуемых аллергенов не должно превышать 4-5.

Оценка внутрикожных тестов

Аллергические диагностические пробы — методы диагностики аллергии. Проводятся после того, как путем тщательного сбора анамнеза выявлен круг подозреваемых аллергенов.
Пробы выполняют вне фазы обострения заболевания и не раньше чем через 2—3 недели после перенесенной острой аллергической реакции, т.к. чувствительность организма к аллергену в течение этого времени снижается.

В зависимости от методики проведения кожные пробы могут быть прямыми и непрямыми.
При прямых кожных пробах аллерген вводят внутрикожно или повреждая эпидермис путем укола, царапины. При капельных и аппликационных прямых кожных пробах аллерген (обычно лекарственный препарат или вещество) наносят на неповрежденную кожу в виде капли или аппликации. Ответная кожная реакция считается положительной при появлении гиперемии, инфильтрации или волдыря. Она может возникнуть в течение 20 минут (немедленная реакция), через 6—12 ч (реакция переходного типа), через 24—48 ч (замедленная реакция). Тип ответной кожной реакции зависит от характера иммунологического механизма аллергической реакции (см. Аллергия).
Среди прямых кожных проб различных видов наиболее чувствительной является внутрикожная, затем следуют скарификационная, укол, аппликационная, капельная.

К непрямым кожным пробам относится реакция Прауснитца — Кюстнера, при которой сыворотку крови больного вводят внутрикожно здоровому человеку и после фиксации антител на коже реципиента (через 24 ч) в то же место вводят аллерген. По развитию местной кожной реакции судят о наличии антител-реагинов в исследуемой сыворотке. Данная реакция не исключает возможности переноса с сывороткой крови возбудителя при наличии скрытой инфекции у донора, поэтому применение ее ограничено.
Наиболее целесообразно выявлять антитела-реагины с помощью различных реакций иммунитета — иммуноферментного метода и др.. Выбор вида кожной пробы зависит от заболевания, предполагаемой степени чувствительности, характера аллергена, а также от реактивности кожи. Прием некоторых лекарственных препаратов (антигистаминных, седативных средств) резко уменьшает реактивность кожи, поэтому перед аллергологическим обследованием необходимо в течение 5—7 дней воздержаться от приема этих лекарственных средств.

В диагностике аллергических болезней нельзя полностью полагаться на кожные пробы и переоценивать их результаты. Постановку кожных проб и оценку их результатов проводит только специально обученный медперсонал.

При несоответствии данных аллергологического анамнеза и результатов кожных проб в период ремиссии показаны провокационные пробы . Эти пробы основаны на воспроизведении аллергических реакций введением аллергена в орган или ткань, поражение которых является ведущим в картине заболевания.
Различают конъюнктивальные, назальные и ингаляционные провокационные пробы .
Конъюнктивальная провокационная проба проводится путем закапывания аллергена в нижний конъюнктивальный мешок. Реакция считается положительной при появлении гиперемии конъюнктивы, слезотечения и зуда век.
Назальную провокационную пробу осуществляют при аллергических ринитах и поллинозах: в одну половину носа закапывают аллерген, а в другую — контрольную жидкость. Реакция считается положительной при возникновении на стороне закапывания аллергена затрудненного носового дыхания и зуда.
Ингаляционный провокационный тест применяют с целью этиологической диагностики бронхиальной астмы: с помощью аэрозольного распылителя больной вдыхает через рот раствор аллергена. Реакция считается положительной в случае снижения более чем на 15% жизненной емкости легких.

К провокационным пробам относятся также холодовая и тепловая пробы, используемые при холодовой и тепловой крапивнице. При отсутствии четких признаков заболевания проводят экспозиционную провокационную пробу . Она основана на непосредственном контакте больного с подозреваемым аллергеном в той среде, в которой больной обычно находится.
Противоположной этой пробе является элиминационная проба — исключение из пищевого рациона предполагаемого аллергена, перевод больного, страдающего бытовой аллергией, в так называемую безаллергенную палату и др.
Лейкоцитопеническую и тромбоцитопеническую провокационные пробы применяют в диагностике пищевой аллергии и лекарственной аллергии. В основе этих проб лежит снижение числа лейкоцитов и тромбоцитов в крови после введения больному испытуемого аллергена.

Кожные пробы на аллергены – это диагностический метод выявления индивидуальной чувствительности организма вследствие введения определенных веществ и последующего анализа воспалительной реакции (появление отека, изменение цвета, болезненность). Показанием для постановки кожных проб являются данные аллергологического анамнеза, показывающие роль одного или группы аллергенов в возникновении заболевания.

Противопоказаниями к проведению кожных проб являются:

Период резкого обострения основного заболевания;

Проявление у больного или астматических симптомов;

Острые инфекции (ангина,ОРВИ, грипп);

Заболевания сердечно-сосудистой системы;

Заболевания крови;

Туберкулезный процесс;

Беременность;

Заболевания печени и почек;

Острая стадия ревматизма;

Длительная терапия гормонами;

Прием антигистаминных препаратов (зиртек, кларитин, интал).

Скарификационные кожные пробы

Место постановки скарификационных кожных проб - поверхность предплечья по средней линии — (можно ставить пробы на коже спины). Одновременно можно поставить 10-15 кожных проб с различными аллергенами. Однако во избежание осложнений, особенно при повышенной чувствительности, рекомендуется одновременно ставить скарификационные пробы только с 2-3 видами аллергенов (особенно у детей).

Методика проведения

Кожу протирают 70-процентным спиртом и дают ей подсохнуть. В нижней трети предплечья, отступив на 4-6 см от лучезапястного сустава, наносят каплю свежеприготовленного раствора гистамина (максимальный срок хранения гистамина -6 часов). Положительная реакция с гистамином свидетельствует о достаточной реактивности кожи. Выше на предплечье наносят каплю тест-контрольной жидкости (контроль отрицательной реакции). Далее по средней линии на расстоянии 5 см друг от друга наносят капли испытуемых аллергенов. Специальными скарификаторами, отдельными для каждого аллергена, наносят две царапины длиной до 6 мм через нанесенные капли гистамина, тест-контрольной жидкости и капли аллергенов так, чтобы не повредить кровеносных сосудов кожи. У детей проводится одна царапина. Через 15 минут в месте царапины капли промокают стерильными тампонами, отдельными для каждой капли.

Прик-тест

Более пригодным для исследования, чем скарификационный, в настоящее время считается тест уколом прик- тест. При этом тесте поверхностное повреждение эпителия делается тонкой, неполной иглой, кожа слегка приподнимается кончиком иглы. При появлении кровотечения тест не оценивается. У больных , вызванным высокой чувствительностью к определённым видам растений, проводят кожные пробы в виде аппликации с экстрактами этих растений.

Аппликационные кожные пробы

Аппликационные кожные пробы проводят на неповрежденных участках кожи. Смачивают кусочек бинта размером 1 см2 и прикладывают его на кожу, сверху закрывают полиэтиленом и закрепляют. Результаты анализируют через 15-20 минут, 5 часов, двое суток.

Внутрикожные пробы

В случае отрицательных результатов скарификационных проб и положительных данных аллергологического анамнеза целесообразно провести внутрикожные аллергические пробы с тем же аллергеном. Вначале в нижнюю треть поверхности предплечья на расстоянии 5 см от лучезапястного сустава вводят тест-контрольную жидкость, затем отдельными стерильными шприцами вводят 0,02 мл каждого аллергена на расстоянии 5 см друг от друга. Реакцию читают через 20 мин - реакция немедленного типа. У очень незначительного числа больных при пыльцевой аллергии могут наблюдаться замедленные реакции (через 6, 24, 48 ч).

Осложнения

При резко положительных пробах иногда наблюдается общая реакция в виде обострения основного заболевания (ринита, конъюнктивита, бронхоспазма). У больных с резко выраженной чувствительностью к определённому аллергену в очень редких случаях может возникнуть , поэтому в кабинете должен быть набор медикаментов, необходимых для оказания срочной помощи.

Ложноположительные результаты

Специфичность скарификационных и внутрикожных проб не является абсолютной. Наиболее частые причины ложноположительных результатов кожных проб - повышенная чувствительность капилляров кожи к механическому воздействию или фенолу,который является консервантом в растворах аллергенов. В таких случаях и тест-контрольная жидкость дает положительную реакцию. Во избежание этого инструменты должны быть обработаны согласно инструкциии во избежание загрязнения аллергенами, остав¬шимися от прошлого тестирования. Устранив причины ложноположительных кожных проб, легче избежать ошибок в диагностике аллергенов.

Ложноотрицательные результаты

Иногда наблюдается отрицательный результат кожной пробы на гистамин. Это объясняется слабой чувствительностью кожных покровов (сниженная реактивность кожи): такую реакцию расценивают как ложноотрицательную. Во избежание ложноотрицательных результатов за 3 дня до проведения специфической диагностики рекомендуется отменить антигистаминные препараты, адреналин, гормоны. Чувствительность кожных проб возрастает в таком порядке: скарификационная, проба уколом, внутрикожная. При ложноотрицательных кожных пробах для получения достоверных результатов тестирование повторяют трижды с интервалом в 3 дня. У некоторых больных могут отсутствовать антитела, фиксированные в кожу; у таких больных кожные реакции на эти аллергены будут отрицательными, и для также необходимо провести другие тесты (провокационные тесты, вспомогательные тесты).

Кожные пробы, являясь одним из основных методов специфической диагностики, не всегда могут быть использованы. Противопоказанием к их проведению является следующее:
- 1. Период обострения аллергического заболевания;
- 2. Острые интеркуррентные заболевания ( , ОРВИ, бронхит и т. д.). В обоих случаях кожное тестирование можно проводить через 3-4 недели после их купирования;
- 3. Декомпенсированные и субкомпенсированные заболевания сердечно-сосудистой системы, печени и почек, эндокринной системы;
- 4. Ревматизм в остром и подостром периодах;
- 5. Туберкулезный процесс в стадии обострения. При последних трех группах заболеваний можно проводить кожное тестирование через 6 месяцев клинико-лабораторной ремиссии;
- 6. Злокачественное заболевание крови и опухолевые заболевания;
- 7. Психические и неврологические болезни. При последних двух группах заболеваний кожные пробы абсолютно противопоказаны;
- 8. Длительное лечение кортикостероидными гормонами. Кожное тестирование возможно не ранее чем через 3 месяца после их отмены;
- 9. Перенесенный в прошлом анафилактический шок (абсолютное противопоказание для кожного тестирования);
- 10. Период приема больным антигистаминных препаратов, антилибераторов (кетотифен, задитен, интал), ксантинов, адреномиметиков, которые могут подавлять кожную аллергическую реакцию. Данные препараты необходимо отменить за 3-5 дней до кожного тестирования.

Недоучет противопоказаний и несоблюдение основных правил постановки кожных проб может быть причиной осложнений или получения нечеткого результата (ложноположительного, ложноотрицательного), что может обусловить неправильный этиологический диагноз и неадекватную терапию.

Причинами ложноположительных результатов могут быть измененная реактивность кожи; повышенная чувствительность кожи к механическим раздражениям; повышенная чувствительность больного к фенолу, который входит в состав растворов аллергенов и тестконтрольной жидкости (во всех этих случаях отмечается положительный результат кожных проб со всеми аллергенами и разводящей жидкостью); загрязнение шприцев аллергеном, оставшимся от прошлого тестирования (поэтому инструменты должны обрабатываться согласно инструкции и необходима их маркировка); индивидуальная повышенная спонтанная деструкция тучных клеток; наличие перекрестных реакций с родственными аллергенами, например, между пыльцевыми или между пыльцевыми и пищевыми.

Причинами ложноотрицательных результатов являются сниженная реактивность кожи (о чем свидетельствует отрицательная проба с гистамином); проведение проб на фоне приема больным антигистаминных препаратов, антилибераторов, адреномиметиков и глюкокортикоидных гормонов; нарушение техники (подкожное введение аллергена вместо внутрикожного, недостаточная глубина скарификации); отсутствие антител в коже (особенно часто это наблюдается у детей первого года жизни, поскольку у них реагины слабо фиксируются в коже); отсутствие «виновного» аллергена в наборе, используемом для кожного тестирования.

При наличии противопоказаний для кожного тестирования или при получении ложноположительного и ложноотрицательного результатов может быть использована непрямая кожная проба - реакция пассивного переноса повышенной чувствительности по Прауснитцу-Кюстнеру (РПК), которая позволяет выявить потенциальные аллергены без риска для больного.

РПК проводится на коже здорового человека - реципиента. Реакция основана на выявлении реагиновых антител в сыворотке больного, которые, будучи введенными в кожу реципиента, фиксируются на тучных клетках дермы, и при последующем введении в эту зону соответствующего аллергена образующийся иммунный комплекс вызывает вследствие выделения гистамина из тучных клеток образование волдыря и гиперемии. По их размерам оценивается кожная реакция.

Показанием для проведения РПК являются: 1) все состояния больного, при которых прямое кожное тестирование противопоказано; 2) нечеткие результаты кожных проб, расхождение их с данными анамнеза; 3) дифференциальная диагностика субклинической и ложноположительного результата кожной пробы; 4) ложноотрицательный результат прямых кожных проб.

Аллергические диагностические пробы - методы диагностики аллергии. Проводятся после того, как путем тщательного сбора анамнеза выявлен круг подозреваемых аллергенов. Пробы выполняют вне фазы обострения заболевания и не раньше чем через 2-3 недели после перенесенной острой аллергической реакции, т.к. чувствительность организма к аллергену в течение этого времени снижается.

В зависимости от методики проведения кожные пробы могут быть прямыми и непрямыми. При прямых кожных пробах аллерген вводят внутрикожно или повреждая эпидермис путем укола, царапины. При капельных и аппликационных прямых кожных пробах аллерген (обычно лекарственный препарат или вещество) наносят на неповрежденную кожу в виде капли или аппликации. Ответная кожная реакция считается положительной при появлении гиперемии, инфильтрации или волдыря. Она может возникнуть в течение 20 мин (немедленная реакция), через 6-12 ч (реакция переходного типа), через 24-48 ч (замедленная реакция). Тип ответной кожной реакции зависит от характера иммунологического механизма аллергической реакции. Среди прямых кожных проб различных видов наиболее чувствительной является внутрикожная, затем следуют скарификационная, укол, аппликационная, капельная.

К непрямым кожным пробам относится реакция Прауснитца - Кюстнера, при которой сыворотку крови больного вводят внутрикожно здоровому человеку и после фиксации антител на коже реципиента (через 24 ч) в то же место вводят аллерген. По развитию местной кожной реакции судят о наличии антител-реагинов в исследуемой сыворотке. Данная реакция не исключает возможности переноса с сывороткой крови возбудителя при наличии скрытой инфекции у донора, поэтому применение ее ограничено. Наиболее целесообразно выявлять антитела-реагины с помощью различных реакций иммунитета - иммуноферментного метода и др. Выбор вида кожной пробы зависит от заболевания, предполагаемой степени чувствительности, характера аллергена, а также от реактивности кожи. Прием некоторых лекарственных препаратов (антигистаминных, седативных средств) резко уменьшает реактивность кожи, поэтому перед аллергологическим обследованием необходимо в течение 5-7 дней воздержаться от приема этих лекарственных средств.

В диагностике аллергических болезней нельзя полностью полагаться на кожные пробы и переоценивать их результаты. Постановку кожных проб и оценку их результатов проводит только специально обученный медперсонал.

При несоответствии данных аллергологического анамнеза и результатов кожных проб в период ремиссии показаны провокационные пробы. Эти пробы основаны на воспроизведении аллергических реакций введением аллергена в орган или ткань, поражение которых является ведущим в картине заболевания. Различают конъюнктивальные, назальные и ингаляционные провокационные пробы. Конъюнктивальная провокационная проба проводится путем закапывания аллергена в нижний конъюнктивальный мешок. Реакция считается положительной при появлении гиперемии конъюнктивы, слезотечения и зуда век. Назальную провокационную пробу осуществляют при аллергических ринитах и поллинозах: в одну половину носа закапывают аллерген, а в другую - контрольную жидкость. Реакция считается положительной при возникновении на стороне закапывания аллергена затрудненного носового дыхания и зуда. Ингаляционный провокационный тест применяют с целью этиологической диагностики бронхиальной астмы: с помощью аэрозольного распылителя больной вдыхает через рот раствор аллергена. Реакция считается положительной в случае снижения более чем на 15% жизненной емкости легких.

К провокационным пробам относятся также холодовая и тепловая пробы, используемые при холодовой и тепловой крапивнице. При отсутствии четких признаков заболевания проводят экспозиционную провокационную пробу. Она основана на непосредственном контакте больного с подозреваемым аллергеном в той среде, в которой больной обычно находится. Противоположной этой пробе является элиминационная проба - исключение из пищевого рациона предполагаемого аллергена, перевод больного, страдающего бытовой аллергией, в так называемую безаллергенную палату и др. Лейкоцитопеническую и тромбоцитопеническую провокационные пробы применяют в диагностике пищевой аллергии и лекарственной аллергии. В основе этих проб лежит снижение числа лейкоцитов и тромбоцитов в крови после введения больному испытуемого аллергена.

М е т о д и ч е с к и е у к а з а н и я

1.Реакция кольцепреципитации по Асколи. В узкую пробирку с небольшим количеством неразведенной преципитирующей сыворотки, держа ее в наклонном положении, пипеткой медленно по стенке наслаивается такой же объем Аг. экстрагированные кипячением из различного сельскохозяйственного сырья. Чтобы не смешать две жидкости, пробирку осторожно ставят вертикально. При положительной реакции в пробирке на границе между сывороткой и исследуемым экстрактом через 5–10 мин появляется серовато–белое кольцо. Постановка реакции обязательно сопровождается контролями сыворотки и антигена.

Реакция Асколи применяется для идентификации сибиреязвенного, туляремийного, чумного Аг. Она нашла также применение в судебной медицине для определения видовой принадлежности белка, в частности кровяных пятен, в санитарной практике при выявлении фальсификации мясных, рыбных, мучных изделий, примесей в молоке. Недостатком этой РП является нестойкость преципитата (кольца), который исчезает даже при легком встряхивании. Кроме того, с ее помощью нельзя определить количественный состав Аг, участвующих в формировании преципитата.

Реакции нейтрализации токсина антитоксической сывороткой in vitro.

2. Выявление токсигенности возбудителя дифтерии в реакции преципита­ ции в геле по Оухтерлони. Реакцию ставят на чашках Петри в лунках агарового геля. В качестве геля используют хорошо отмытый прозрачный агар. Аг и сыворотки вносятся в агаровый гель так, чтобы лунки, содержащие их, находились на определенном расстоянии. Диффундируя навстречу друг другу и соединяясь друг с другом, антитело и антиген образуют через 24–48 ч иммунный комплекс в виде белой полосы. При наличии сложного по составу преципитиногена возникает несколько полос. При этом полосы серологически родственных антигенов сливаются воедино, а полосы разнородных перекрещиваются, что позволяет определить детали антигенной структуры исследуемых веществ. Широко используется для диагностики заболеваний, вызываемых вирусами и бактериями, продуцирующими экзотоксины.